### 一、细胞培养条件

**细胞名称：** 人肺动脉平滑肌HPASMC
**生长特性：** 贴壁生长
**冻存条件：** 无血清冻存液
**培养体系：** SMCM（ScienCell，1101）
**传代方法：** 第一次建议1:2传代，传代情况2天换液
**备注：** 用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们提供的完全培养基。

### 二、细胞收到后处理

在细胞处于良好状态后，满液封瓶是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞图像（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后记得将瓶盖拧松。）

### 三、细胞培养步骤

**a. 细胞传代：**
如果细胞汇合度未超过80%，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基放入37℃、5%CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以完全脱落，吸出后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

**b. 细胞冻存：**
1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上再转入液氮罐。

**c. 细胞复苏：**
1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀后再用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱培养；
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中贴壁不牢，容易脱落。这是常见现象。如脱离较多，可将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可进行对比培养）。沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清后补充1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况和标准：
- 细胞运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况，符合重发条件；
- 细胞污染问题请在收到产品48小时内提供真实实验结果，确认后将重发；
- 常温发货细胞在静置24小时后，干冰发货细胞在复苏24小时后，若大部分未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），将重发；
- 若干冰发货复苏细胞在24小时内或常温发货静置4小时未开封后出现污染，符合重发条件；
- 细胞活性问题需在收到产品7天内用台盼蓝染色法进行活力鉴定，确认后重发；
- 细胞收到当天及第2、3天拍照，若3天内未告知，视为产品合格。若4-7天内出现问题并提供收到细胞前3天照片及相关操作细节，与技术人员沟通判定为我方责任，则重发；若判定为双方责任，将协商处理或按合同价的50%收取重发费。

2）细胞问题不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染不重发；
- 客户不当操作导致细胞状态不良不重发；
- 非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良不重发；
- 细胞状态不良，未提供细胞培养前3天照片的不重发；
- 细胞培养时经过其它处理的不重发；
- 收到细胞后2天内未告知的问题不重发；
- 其他情况根据具体情况而定。

通过合作与**尊龙凯时人生就博**，您可以有效解决细胞培养中的各类问题，并确保您研究的前沿成果不受影响。